توجه 

طبق آخرین هماهنگی با استاد منابعی که باید برای امتحان بخونیم به شرح زیر است:

1_ اسلاید ها ( شامل 3پوشه هست..1,2 و کنترل کیفی)

2_جزوه ی چند صفحه ای محیط کشت ها, جلسه ی اخر 
نکته: اسلاید ها در کانکس دانشگاه به صورت سی دی هست اگر تو سی دی پوشه ی دیگه ای هم هست واسه بچه های زیسته نه ما
در بین اسلاید ها بخش هایی که عملیه مثل تست اپتوچین و .. لازم نیست

---

 منبع : علیرضا بقایی آریا / نماینده کلاس میکروب 

پ.ن : لینک دانلود اسلاید های مورد نیاز امتحان 


پوشه شماره 1 و 2   /   دانلود 
کنترل کیفی /   دانلود 

*عکس های آزمایشگاه انگل شناسی 2 *

اختصاصی وبلاگ

**** مدیر وبلاگ در باره صحت مطالب اسلاید ها مسئولیتی ندارد ... لطفا با جزوه استاد چک کنید ****

بقیه عکس ها در ادامه مطلب ...

توجه : جلسه  حشره موضوع پشه ها رو در این لینک قرار دادم 

دانلود 

آموزش انگل شناسی پزشکی

دانلود PDF های آموزشی

منبع : Lab-b.rzb.ir

در این پست سعی می کنم فایل های آموزشی انگل شناسی پزشکی که شامل PDF های نکات استخزاج شده است رو قرار بدم .

نکات بر اساس کتاب های رفرنس می باشد 

قسمت اول | مقدمه انگل شناسی

قسمت دوم | کرم شناسی پزشکی

قسمت سوم | آسکاریس

قسمت چهارم | آمیب ها 

ادامه دارد . . .

* پست ثابت 2*

ویژه علوم آزمایشگاهی

مشکلات جامعه علوم آزمایشگاهی 

با توجه به مشکلات جامعه علوم آزمایشگاهی و سکوت خود خواسته جامعه علوم پزشکی ، وزارت بهداشت و در آخر خودمون !  در این مملکت پزشک سالار تصمیم گرفتم موضوعی با نام " مشکلات جامعه علوم آزمایشگاهی" رو باز کنم . 

به امید روز های خوب که میدونم میان .

( بگو اگر چه به جایی نمیرسد فریاد ... کلام حق دم شمشیر می شود گاهـــــــــــــی . . . )

با توجه به اهمیت این موضوع در وبلاگ ثابت خواهد بود 

هم رشته ایی های عزیز هم در این پست و پست های مربوطه میتونن حرف هاشونو بزنن تا در وبلاگ با اسم خودشون قرار بدیم .

در این قسمت هم لینک های مربوط به مشکلات بچه های علوم آزمایشگاهی  که در این وبلاگ به اون ها پرداخته شده رو قرار میدم 

لینک ها : 

1) قسمت اول - پاتولوژیست های محترم !

2) قسمت دوم - لطفا بازنگری کنید !

3) قسمت سوم - نه چک زدیم نه چونه عروس اومد تو خونه !

4) قسمت چهار - بخوانید حدیث مفصل از ایم مجمل !                                                                                                                    

5)قسمت پنج - دوستان این پست را " دبل چک " کنید ، لطفا 

6) لینک مربوطه در علوم پزشکی دات کام !

7) نکات لازم جهت استخدام در آزمایشگاه تشخیص طبی

8) داستان یک " پی اچ دی "

9) سرگذشت نوار ادراری!

خطا در جمع آوری یا نگهداری نمونه به شیوه نامناسب

۱- نمونه گیری از بیمار دیگر

۲- نمونه خون با برگه درخواست بیمار دیگر

۳- رقیق بودن نمونه، مثلا نمونه از محلی گرفته می شود که در بالاتر از آن تزریق وریدی انجام می شود.

۴- استفاده از EDTA بسیار غلیظ (ایجاد چروکیدگی گلبول های قرمز و کاهش کاذب هماتوکریت)

۵- لخته شدن قسمتی از نمونه ( وجود لخته های ریز و کوچک در نمونه )

۶- غلیظ بودن نمونه به علت استفاده طولانی از تورنیکت (بیش از یک دقیقه)

۷- همولیز نمونه

۸- بیش از حد گرم شدن یا منجمد کردن نمونه

۹- نمونه ی خون کهنه

۱۰- نمونه آلوده به چربی زیر جلدی

خطا در برداشت نمونه توسط دستگاه

۱- خطا در شست و شوی اولیه و آماده سازی دستگاه (سبب شمارش زمینه ای بالای شمارنده در زمان شروع کار می شود)

۲- عدم اختلاط کافی نمونه قبل از تحویل نمونه به دستگاه شمارنده سلولی

۳- انسداد مسیر مکش دستگاه (توسط لخته که از نمونه قبلی باقی مانده است)

۴- تداخل نمونه بسیار غیر طبیعی قبلی با نمونه فعلی (carry over )

5- نقص اولیه در دستگاه

۶- حجم نا کافی نمونه

خطا در کالیبراسیون

۱- استفاد از مواد کنترلی به عنوان کالیبراتور

۲- خطا در تعیین دقیق مقادیر پارامتر ها برای روش کالیبراسیون

۳- خطای خروج از کالیبراسیون (خروج از کالیبر شمارنده به دلیل سرویس عمومی دستگاه، تعویض قطعه کلیدی، تعویض سری ساخت معرف ایزوتون یا سایر معرف ها)

نگهداری نامناسب دستگاه

چند مثال: عدم شستشو مکرر دستگاه، عدم توجه به شمارش زمینه‌ای بالا دستگاه در شروع به کار سل‌ کانتر، عدم توجه به تعویض محلول‌ها و معرف‌های معیوب در زمان بروز خطا و…

اختلال عملکرد دستگاه به دلایل مختلف و اشکال در معرف ها

عدم صحت اندازه گیری دستگاه به دلیل ماهیت برخی برخی روش های اندازه گیری که برای دستگاه طراحی شده

تعیین میزان MCV کمتر از مقدار واقعی در صورت وجود گلبول های قرمز هیپوکروم در دستگاه های امپدانس

ناتوانی شناسایی سلول ها در صورت کمبود آنزیم پراکسیداز، در برخی از دستگاه ها

عدم صحت عملکرد دستگاه به دنبال ویژگی خاص در نمونه

۱- خطا در تعیین میزان هموگلوبین و اندکس های گلبولی به دلیل وجود آگلوتینین های سرد یا افزایش چربی خون

۲- نوتروپنی کاذب در صورت کمبود آنزیم پراکسیداز، در برخی از دستگاه ها

چند مثال از منابع خطای ناشی از افزایش غلظت ضد انغقاد EDTA

الف: چروکیدگی گلبول‌های قرمز و کاهش کاذب هماتوکریت به روش دستی (املاح دی‌ پتاس اثرات چروکیدگی سلولی کمتری نسبت به املاح تری‌ پتاس دارا می‌باشند).

ب: ترومبوسیتوپنی کاذب به دلیل چسبندگی پلاکت‌ها به جدار خارجی نوتروفیل‌ها / ترومبوسیتوزیس کاذب به دلیل شکستن و لیز پلاکت‌ها به قطعات کوچک‌تر

ج: تبدیل پلاکت از حالت دیسکوئید به کروی و افزایش حجم پلاکت

د: خون حاوی ضد انعقاد حداکثر در مدت ۶ ساعت پس از نمونه‌برداری بایستی آنالیز گردد. تهیه گسترش خونی بهتر است همزمان با نمونه‌برداری یا حداکثر ۱ ساعت پس از نمونه‌برداری صورت گیرد تا کمترین تغییرات مرفولو‍ژیک حاصل گردد.

ایمنی 

اگر خود شما تا به حال در یک آزمایشگاه بیماری‌های عفونی کار نکرده باشید، احتمالا در تلویزیون دیده اید که دانشمندان پزشکی برای تشخیص بیماری‌ها یا تحقیق بر روی گونه‌های میکروبی در آزمایشگاه از ماسک، عینک محافظ، دستکش و لباس‌های مخصوص استفاده می‌کنند. در هنگام کار با باکتری‌های بیماری زا و ویروس ها، اولویت نخست این است که خود شما بیمار نشوید.

احتمالا شما در دوران دبیرستان با پی‌پت آشنا شده اید. پیپت ابزاری آزمایشگاهی است که معمولا از جنس شیشه بوده و برای اندازه گیری و انتقال مایعات از آنها استفاده می‌شود و احتمالا اولین چیزی که در مورد پیپت به شما گوشزد کرده اند، این بوده است که هرگز نباید آن را به وسیله دهان (مکش) پر کنید و بهتر است از پوآر استفاده کنید.

آیا شما جرات می‌کنید در یک محیط آزمایشگاهی که به بررسی باکتری ها و ویروس‌ها می‌پردازید، پیپت را با دهان خود از محلول مورد آزمایش پر کنید؟ احتمالا پاسخ خواهید داد که این کار حماقت است.

احتمالا شما این موضوع را که پر کردن پیپت با استفاده از دهان توسط میکروبیولوژیست‌ها در دهه هفتاد قرن بیستم امری شایع بود را به راحتی باور نکنید، اما این یک واقعیت ترسناک است.

مقاله ای که در سال ۱۹۹۵ به ارزیابی حوادث آزمایشگاهی پرداخته شده بود، نشان داد که ۱۳٪ از عفونت های آزمایشگاهی مربوط به پیپتینگ با استفاده از دهان بود. یعنی در آزمایشگاه به عمد یک پیپت یا لوله مویین را به دهان خود قرار داده بودند و محلول مملو از میکروب ها را مکیده بودند.

گزارش کار آزمایشگاه میکروب شناسی 

تست آنتی بیوگرام

آنتی بیوگرام : این تست جهت تعیین حساسیت باکتری ها به آنتی بیوتیک های مختلف به کار می رود

از محیط کشت MHA (MUELLR HINTON AGAR) برای این تست استفاده می شود. از دیسک های حاوی مقادیر مشخص آنتی بیوتیک های مختلف بر روی کشتی از باکتری ها استفاده می شود که باعث نفوذ آنتی بیوتیک در آگار می شود و ناحیه ی موثر توسط باکتری ها به وسیله ی عدم رشد باکتری مشخص می شود. هر چه تاثیر آنتی بیوتیک بر روی باکتری بیشتر باشد قطر هاله ی عدم رشد نیز بیشتر می شود.

وسائل و موارد مورد نیاز برای تست انتی بیوگرام "دیسک دیفیوژن"

1. محیط کشت که آنتی بیوگرام بر روی آن انجام می شود که "آگار مولر هینتون" می باشد 
2. لوله حاوی نیم مک فارلند .
3. لوله حاوی یک سی سی سرم فیزیولوژِی استریل
4. دیسک های انتی بیوگرام
5. باکتری خالص در محیط کشت مناسب
6. سواب ، انس ، شعله ، هود ، چراغ

استاندارد نیم مک فارلند :

روش انجام کار:

استاندارد نيم مک فارلند سولفات باريم به روش زير تهيه مي شود:

1) 5/0 ميلي‌ ليتر از کلرور باريم BaCl2) )۰/۰۴۸ mol/L(W/V BaCl₂/H₂O) ۱/۱۷۵% ) را به 5/99 ميلی‌ليتراسيد سولفوريک mol/L (۱% V/V) ۰/۱۸ اضافه کنيد و با هم زدن مداوم يک سوسپانسيون تهيه نمائيد.

2) چگالي صحيح کدورت استاندارد با استفاده از اندازه گيري جذب در اسپکترو فوتومتر با طول مسیر نوري یک سانتی متر، مشخص شود. جذب در ۶۲۵ نانومتر بايد بين 08/0 تا 13/0 باشد.

3 روش برای تست آنتی بیوگرام وجود دارد :

• دیسک دیفیوژن
• آگار دایلوشن
• براث دایلوشن

روش انجام تست  دیسک دیفیوژن:

بعد از ایزوله کردن باکتری ، مقداری از کلونی باکتری را به وسیله انس (نه لوپ) برداشته و در سرم فیزیولوژی استریل حل می کنیم . باید در نظر داشت که چون ، در تست آنتی بیوگرام میزان کدر بودن برای ما خیلی مهم است ، بنابراین در انتخاب مقدار نمونه باید دقت کنیم تا نمونه را بیشتر یا کمتر از نیم مک فارلند برنداریم . اگر میزان کدورت کمتر از نیم مکفارلند باشد ، مقداری دیگر از نمونه را در سرم فیزیولوژی استریل حل می کنیم و یا اگر میزان کدر بودن ، بیشتر از نیم مک فارلند باشد در این صورت باید مقداری سرم فیزیولوژی استریل اضافه کرد تا به کدورت مناسب و برابر با نیم مک فارلند برسیم . بعد از تهیه محلول هموژن خود ، با سواب استریل محلول را به هم زده و بعد از آبکشی کردن سواب ، (برای آب کشی ، سواب را با قدرت به دیواره لوله تکیه داده و فشار دهید تا آب آن گرفته شود .) آن را به محیط کشت مولر هینتون انتقال می دهیم و به طور کامل به وسیله سواب ، محیط کشت را به صورت چمنی کشت می دهیم به طوری که هیچ محلی در محیط از قلم نیافتد  . بعد از کشت ، دیسک های انتی بیوگرام که قبل از نیم ساعت از تست ، بیرون یخچال قرار داده شده اند را انتخاب و بر روی محیط کشت انتقال می دهیم . باید ذکر کنم که نحوه قرار دادن دیسک ها در محیط کشت مولر هینتون ، به صورت دایره ای  است و فاصله این دیسک ها از هم دیگر حدود 12 میلیمتر باشد و باید از دیواره هم فاصله داشته باشند . در ضمن فاصله این دیسک ها را می توان با توجه به تجربه خود کم و یا زیاد کنیم . دیسک های مورد استفاده هم باید با نوع باکتری ایزوله شده ما مناسب باشد مثلا هیچ وقت برای باکتری گرم منفی ، پنی سیلین قرار نمی دهیم چون نسبت به آن مقاوم هستند و یا اینکه آنتی بیوتیک کلروامفینیکل را برای کشت ادرار قرار نمی دهیم چون این انتی بیوتیک نمی تواند وارد مجاری ادراری شود و... بعد از قرار دادن دیسک ها ، در پلیت را بسته و به مدت 24 ساعت آنها را در دمای 37 درجه سانتیگراد ، انکوبه می کنیم (لازم به ذکر است که بنابه به تحقیقات تازه محقین ، دمای انکوبه برای آنتی بیوگرام به ۳۵ درجه کاهش یافته است و مدت زمان آن هم به ۱۶ تا ۱۸ ساعت کاهش یافته است ) . بعد از 24 ساعت پلیت را زیر چراغ برسی می کنیم  .آنگاه مي‌بايد قطر هاله عدم رشد را با خط‌كش اندازه گيري کرد و با توجه به جدول همراه دیسک ها ، گزارش تست انتی بیوگرام خود را برای هر یک از انتی بیوتیک ها ، به صورت حساس (Susceptible ) ،مقاوم (Resistant) و یا نیمه حساس (Intermediate) گزارش می شود .

همان طور که مشاهده می کنید در اطراف برخی از دیسک ها هاله روش وجود دارد که این نشان دهنده حساس بودن ان بکتری به ان دیسک است و باید حساس گزارش شود . همچنین در اطراف بعضی از دیسکها هیچ گونه هاله ای نیست در این حالت این باکتری را باید نسبت به ان دیسک مقاوم گزارش داد . اگر طبق جدول خود هیچ یک از حالات فوق مشاهده نشود در اینصورت نیمه حساس را گزارش می کنیم .

و چند نکته مهم  :

• در اندازه گیری از خط کش معمولی و یا ویژه این کار استفاده کنید .
• همیشه امتداد خط کش باید از وسط دیسک عبور کند .
• همیشه قطر اندازه گیری می شود .
• باید در تست انتی بیوگرام ، نگاه بدبینانه ای داشت . یعنی اینکه کوتاهترین مسیر را برای تعیین حساسیت انتخاب می کنیم .
• اگر در اطراف دیسک خط هایی کشیده شده باشد در این صورت باید از اخرین خطی که بعد از ان دیگر کلونی نیست تعیین حساسیت کرد.
• اگر در اطراف دیسک حتی یک کلونی هم باشد باید از همان جا تا دیسک را اندازه گیری کرد نه کل هاله را .
• همیشه به محل هاله دقت کنید بازم می گم همیشه و کوتاهترین مسیر ار انتخا کنید .
• دیسک ها و هاله ها را در زیر نور برسی کنید .

• آمینوگلیکوزید ها بر روی باکتری های بی هوازی تاثیر می گذارند .
• کلروامفینیکل در نمونه ادراری استفاده نمی شود چون وارد ادرار نمی شود .
• ونکومایسن ، اریترومایسن ، کلیندمایسن ، پنی سیلین و چند تا دیگه بر روی باکتری های گرم مثبت تاثیر می ذارند .
•  دیسک ایمیپنم هم برروی گرم مثبت و هم بر روی گرم منفی تاثیر دارد ولی باید در عفونت های شدیدی استفاده شد تا مقاومت ایجاد نشود .
• سفالکسین که بر روی گرم مثبت و منفی تاثیر دارد به صورت خوراکی است .
• تتراسایکلین آنتی بوتیک وسیع الطیفی است و معمولا به صورت موضعی استفاده می شود

گزارشکار آزمایشگاه میکروب شناسی

رنگ آمیزی کپسول 

رنگ آمیزی کپسول

اهداف

-مشاهده كپسول باكتري

-آشنايي با ساختاروكاربرد كپسول درباكتري

مقدمه

بعضی از باکتریها ماده لزجی از خود ترشح می کنند که خارج از سلول و پیرامون آن جمع می شود و دیواره سلولی را می پوشاند . این لایه کپسول نامیده می شود که ضخامتهای متفاوت و چسبندگی متغیر دارد. اندازه کپسول به محیط کشت میکروبی بستگی دارد و همچنین باکتریهای بیماریزا ، در بین باکتریهای تولید کننده کپسول ، کپسولهای بزرگتری دارند. جنس این کپسول از پلی ساکارید است که در آب محلول و غیر یونی است .

کاربرد کپسول در باکتریها :

کپسول بعنوان یک سد اسمزی بین باکتری و محیط اطراف آن عمل می کند و در واقع  نقش حفاظتی دارد. کپسول مانع از عمل بیگانه خواری گلبولهای سفید می شود همچنین بعنوان مخزن ذخیره مواد غذایی یا دفع مواد زائد هم می تواند عمل کند.

در تعدادی از باکتریهای بیماریزا ، وجود کپسول شدت بیماریزایی و عفونت زایی را افزایش می دهد و ممکن است حتی این بیماریزایی به وجود کپسول بستگی داشته باشد . مثلا در استرپتوکوکوس پنومونیا اگر توانایی تولید کپسول در باکتری از بین برود این باکتری غیر بیماریزا می شود.

در عمل رنگ آمیزی شرط رنگ گیری یک سلول یونی بودن آن می باشد یعنی وقتی سلول حالت یونی داشته باشد هنگام رنگ آمیزی بین نواحی یونیزه سطح سلول و اجزای یونیزه مولکولهای رنگ پیوند بوجود می آید . در نتیجه بین بارهای مخالف موجود در سطح سلول و مولکولهای رنگ پیوند یونی تشکیل می شود و باکتری رنگ می گیرد . اما چون کپسول را بعلت غیر یونی بودن آن نمی توان رنگ آمیزی کرد در نتیجه برای دیدن آن در زیر میکروسکوپ ، زمینه باکتری رنگ آمیزی می شود و در نتیجه امکان دیدن کپسول باکتری که بصورت بیرنگ ظاهر می شود ، فراهم می شود. این روش را رنگ آمیزی منفی می نامند.

در این روش رنگ آمیزی برای تثبیت گسترش از حرارت استفاده نمی شود . چون در اثر حرارت ، باکتری در داخل کپسول از شکل طبیعی خود خارج می شود.

روش انجام:

روش جوهر هندی :  ابتدا یک لام تمیز برداشته و یک قطره از سوسپانسیون باکتری را روی آن می گذاریم . سپس یک قطره جوهر هندی در کنار آن می گذاریم و با یک لام دیگر با زاویه 45 درجه روی آن میکشیم و گسترش را تهیه میکنیم و در دمای اتاق خشک میکنیم . سپس با روغن ایمرسیون و عدسی 100 مشاهده میکنیم

روش Hiss

در ان روش یک قطره سرم فیزیولوژِی را روی لام می گذاریم و بوسیله لوپ مقداری کلنی باکتری را در آن حل می کنیم و در دمای اتاق اجازه می دهیم تا خشک شود . سپس 2دقیقه با رنگ کریستال ویوله آغشته میکنیم و با سولفات مس لام را می شوییم . و بعد از خشک شدن با عدسی 100 مشاهده می کنیم

جسم باکتری : آبی تیره    /    کپسول آبی کمرنگ

روش سوم : یک قطره سرم فیزیولوژی وسط لام قرار داده کلینی باکتری را درونش حل میکنیم . و به ان یک قطره رنگ نیگروزین اضافه میکنیم . و پس از خشک شدن به مدت 1-2 دقیقه با رنگ متیلن بلو آغشته کرده و بعد از شستشو زیر میکروسکوپ مشاهده میکنیم

کپسول هاله شفاف  /  جسم آن آبی تیره

نتيجه گيري

از انجام آزمايش فوق نتيجه ميگيريم كه باكتري كلبسيلاپنومونيه داراي كپسول است.و كپسول آن طبق اين آزمايش به صورت رنگ نشده در زمينه تاريك در زير ميكروسكوپ مشاهده مي شود.

گزارشکار آزمایشگاه میکروب شناسی 

آشنایی با انواع روش های کشت 

آشنایی با روش های کشت :

کشت در پلیت : به سه روش قابل انجام است

1-        کشت خطی

2-        کشت سطحی

3-        کشت آمیخته یا پورپلیت

روش کشت خطی :

در این روش از محیط پیش ریخته استفاده می شود. به این ترتیب که ابتدا بوسیله یک آنس سترون شده مقداری از پرگنه باکتری را برداشته و آنرا روی سطح محیط پیش ریخته بصورت خطهای موازی و در چند جهت می کشید . در کشتهای خطی برای بدست آوردن کلنی های تک می توانید پلیت را به 4 قسمت تقسیم کنید بعد در قسمت اول ابتدا نوک آنس را که محتوی پرگنه باکتری است را بصورت خطهای موازی کشیده و بعد خطوط را در منطقه دوم از انتهای خط انتهایی منطقه اول در جهت دیگر ادامه می دهید و در منطقه سوم و چهارم هم به همین صورت عمل می کنید . خصوصیت این روش این است که وقتی خطوط موازی را روی سطح محیط می کشید به ترتیب از تراکم باکتریها کاسته می شود و به انتهای خط که می رسید تراکم باکتری کمتر است و در منطقه دیگر وقتی از انتهای خط منطقه قبلی استفاده می کنید در واقع تراکم بسیار کمتر از تراکم باکتریها در ابتدا می باشد و در نتیجه در مناطق دیگر هم به ترتیب از تعداد باکتریها کاسته می شود تا جائیکه در منطقه چهارم شما می توانید پرگنه های تکی داشته باشید که کلنی خالص نامیده می شود. بنابراین انجام درست کشت خطی منجر به ایجاد کلنی خالص می شود این کلونی تنها از یک باکتری مادری بوجود می آید (تعریف کلنی خالص). باکتریهای  منفرد را باکتریهای مادر می نامند که این باکتریها پس از کشت خطی و جدا شدن سلولهای باکتری از یکدیگر بوجود می آیند.

توجه داشته باشید که کلنی خالص به کلنی گفته می شود که با کلنی دیگر تماس نداشته باشد.

در مورد محیطهای کشت باکتریایی که بصورت مایع می باشند برای انجام کشت خطی روی محیط پیش ریخته فقط یکبار لوپ را داخل محیط محتوی باکتری کرده و یک لوپ از آن بردارید سپس آنرا روی محیط پیش ریخته قرار داده و بصورت خطوط موازی آنرا در چند جهت بکشید.و یا مراحل فوق را روی آن انجام دهید.

 کشت سطحی :

در این نوع کشت هم از محیط پیش ریخته استفاده می شود.

نحوه کشت :

این روش کشت بیشتر برای محیطهای مایع میکروبی کاربرد دارد و یا اگر محیط مایعی مانند شیر مشکوک به آلودگی میکروبی باشد آن را می توان به این روش کشت میکروبی داده و میکروارگانیسمهای موجود در آن را مشخص نمود.

برای اینکار ابتدا یک رقت معینی از محیط مایع تهیه نمائید. سپس با استفاده از پیپت استریل مقدار مشخصی از آن رقت را برداشته و در سطح محیط جامد پیش ریخته توسط میله پخش کننده یا توک آنس پخش نمائید. و بعد از انکوباسیون می توانید کلنی های رشد یافته در سطح محیط کشت را مشاهده کنید توجه داشته باشید که هنگام انجام کشت سطحی باید سطح محیط خشک باشد .

چون هنگام ریختن محیط کشت بصورت پیش ریخته ممکن است بخار آب روی درب پلیت و سطح محیط جمع شود برای خشک کردن آن می توان محیطها را در یک گرمخانه با دمای 50-25 درجه قرار داده و خشک نمود.به این ترتیب که درب پلیت را برداشته و قسمت محتوی محیط کشت را وارونه روی لبه درب قرار دهید تا قطرات رطوبت حذف گردد.

همچنین می توانید پس از ریختن محیط کشت در پلیت در صورت تجمع حباب هوا ، آنها را با شعله دادن سطح محیط حذف نمائید. اینکار باعث سترون شدن سطح محیط کشت هم می شود.

کشت آمیخته  یا پورپلیت :

در این روش کشت هم نیاز به تهیه سوسپانسیون از باکتری می باشد . یعنی باید از باکتری مورد نظر در محیط مایع رقت معینی را تهیه نموده بعد به میزان 1 سی سی از آنرا در کف پلیت استریل ریخته سپس از محیط کشت مورد نظر که قبلا استریل شده و حرارت آن به حدود 45 درجه سانتیگراد رسیده بمیزان 15-20 سی سی به پلیت اضافه نمائی. سپس با حرکات دورانی بصورت عدد 8 انگلیسی آنرا کاملا مخلوط کنید. اگر نیاز بود مجددا سطح محیط آمیخته با باکتری را با یک لایه نازکی از همان محیز کشت بپوشانید دراینحالت به آن کشت دولایه هم گفته می شود